Благодарим ви, че посетихте nature.com. Версията на браузъра, която използвате, има ограничена поддръжка на CSS. За най-добро изживяване препоръчваме да използвате най-новата версия на браузъра (или да изключите режима на съвместимост в Internet Explorer). Освен това, за да се гарантира непрекъсната поддръжка, този сайт няма да включва стилове или JavaScript.
Меламинът е признат замърсител на храните, който може да присъства в определени категории храни както случайно, така и умишлено. Целта на това проучване беше да се провери откриването и количественото определяне на меламин в бебешката формула и млякото на прах. Анализирани бяха общо 40 търговски достъпни хранителни проби, включително бебешка формула и мляко на прах, от различни региони на Иран. Приблизителното съдържание на меламин в пробите беше определено с помощта на високоефективна течна хроматография-ултравиолетова (HPLC-UV) система. Построена е калибрационна крива (R2 = 0.9925) за откриване на меламин в диапазона 0.1–1.2 μg mL−1. Границите на количествено определяне и откриване бяха съответно 1 μg mL−1 и 3 μg mL−1. Меламинът беше тестван в бебешката формула и млякото на прах и резултатите показаха, че нивата на меламин в пробите от бебешката формула и млякото на прах са съответно 0.001–0.095 mg kg−1 и 0.001–0.004 mg kg−1. Тези стойности са в съответствие със законодателството на ЕС и Кодекс Алиментариус. Важно е да се отбележи, че консумацията на тези млечни продукти с намалено съдържание на меламин не представлява значителен риск за здравето на потребителите. Това се потвърждава и от резултатите от оценката на риска.
Меламинът е органично съединение с молекулна формула C3H6N6, производно на цианамид. Той има много ниска разтворимост във вода и е приблизително 66% азот. Меламинът е широко използвано промишлено съединение с широк спектър от легитимни приложения в производството на пластмаси, торове и оборудване за преработка на храни (включително опаковки за храни и кухненски съдове)1,2. Меламинът се използва и като лекарствен носител за лечение на заболявания. Високото съдържание на азот в меламина може да доведе до злоупотреба със съединението и придаване на свойствата на протеинови молекули на хранителните съставки3,4. Следователно, добавянето на меламин към хранителни продукти, включително млечни продукти, увеличава съдържанието на азот. По този начин погрешно е било направено заключението, че съдържанието на протеини в млякото е по-високо, отколкото е било в действителност.
За всеки добавен грам меламин, съдържанието на протеини в храната ще се увеличи с 0,4%. Меламинът обаче е силно разтворим във вода и може да причини по-сериозни вреди. Добавянето на 1,3 грама меламин към течни продукти като мляко може да увеличи съдържанието на протеини в млякото с 30%5,6. Въпреки че меламинът се добавя към животински и дори човешки храни, за да се увеличи съдържанието на протеини7, Комисията по Codex Alimentarius (CAC) и националните органи не са одобрили меламина като хранителна добавка и са го посочили като опасен при поглъщане, вдишване или абсорбиране през кожата. През 2012 г. Международната агенция за изследване на рака към Световната здравна организация (СЗО) посочи меламина като канцероген от клас 2B, тъй като може да бъде вреден за човешкото здраве8. Дългосрочното излагане на меламин може да причини рак или увреждане на бъбреците2. Меламинът в храната може да се комплексира с цианурова киселина, за да образува неразтворими във вода жълти кристали, които могат да причинят увреждане на тъканите на бъбреците и пикочния мехур, както и рак на пикочните пътища и загуба на тегло9,10. Може да причини остро хранително отравяне и, във високи концентрации, смърт, особено при кърмачета и малки деца.11 Световната здравна организация (СЗО) също така е определила допустимия дневен прием (TDI) на меламин за хора на 0,2 mg/kg телесно тегло на ден въз основа на насоките на CAC.12 Американската агенция по храните и лекарствата (US FDA) е определила максимално допустимото ниво на остатъци от меламин на 1 mg/kg в адаптираното мляко за кърмачета и 2,5 mg/kg в други храни.2,7 През септември 2008 г. беше съобщено, че няколко местни производители на адаптирано мляко за кърмачета са добавили меламин към мляко на прах, за да увеличат съдържанието на протеини в своите продукти, което е довело до отравяне с мляко на прах и е предизвикало национален инцидент с отравяне с меламин, който е разболял над 294 000 деца и е хоспитализирал над 50 000.13
Кърменето не винаги е възможно поради различни фактори, като например трудностите на градския живот, заболявания на майката или детето, което води до използването на адаптирано мляко за хранене на кърмачета. В резултат на това са създадени фабрики за производство на адаптирано мляко, което е възможно най-близко по състав до кърмата14. Адаптираното мляко, продавано на пазара, обикновено се произвежда от краве мляко и обикновено се приготвя със специална смес от мазнини, протеини, въглехидрати, витамини, минерали и други съединения. За да бъде близко до кърмата, съдържанието на протеини и мазнини във формулата варира и в зависимост от вида мляко, то се обогатява със съединения като витамини и минерали, като желязо15. Тъй като кърмачетата са чувствителна група и съществува риск от отравяне, безопасността на консумацията на мляко на прах е от жизненоважно значение за здравето. След случая на отравяне с меламин сред китайски кърмачета, страни по света обърнаха голямо внимание на този въпрос и чувствителността на тази област също се увеличи. Ето защо е особено важно да се засили контролът върху производството на адаптирано мляко, за да се защити здравето на кърмачетата. Съществуват различни методи за откриване на меламин в храни, включително високоефективна течна хроматография (HPLC), електрофореза, сензорен метод, спектрофотометрия и ензимно-свързан имуносорбентен анализ антиген-антитело16. През 2007 г. Американската агенция по храните и лекарствата (FDA) разработи и публикува HPLC метод за определяне на меламин и цианурова киселина в храни, който е най-ефективният метод за определяне на съдържанието на меламин17.
Концентрациите на меламин в адаптираното мляко за кърмачета, измерени с помощта на нова техника за инфрачервена спектроскопия, варираха от 0,33 до 0,96 милиграма на килограм (mg kg-1).18 Проучване в Шри Ланка установи, че нивата на меламин в пълномаслено мляко на прах варират от 0,39 до 0,84 mg kg-1. Освен това, внесените проби от адаптирано мляко за кърмачета съдържаха най-високите нива на меламин, съответно 0,96 и 0,94 mg/kg. Тези нива са под регулаторния лимит (1 mg/kg), но е необходима програма за мониторинг за безопасността на потребителите.19
Няколко проучвания са изследвали нивата на меламин в иранските адаптирани млека за кърмачета. Около 65% от пробите са съдържали меламин, със средно 0,73 mg/kg и максимум 3,63 mg/kg. Друго проучване съобщава, че нивото на меламин в адаптираното мляко за кърмачета варира от 0,35 до 3,40 μg/kg, със средно 1,38 μg/kg. Като цяло, наличието и нивото на меламин в иранските адаптирани млека за кърмачета са били оценени в различни проучвания, като някои проби, съдържащи меламин, са надвишили максималната граница, определена от регулаторните органи (2,5 mg/kg/храна).
Като се има предвид огромната пряка и непряка консумация на мляко на прах в хранителната промишленост и особеното значение на адаптираното мляко за хранене на децата, това проучване имаше за цел да валидира метода за откриване на меламин в мляко на прах и адаптирано мляко на прах. Всъщност, първата цел на това проучване беше да се разработи бърз, прост и точен количествен метод за откриване на фалшифициране на меламин в адаптирано мляко на прах и мляко на прах, използвайки високоефективна течна хроматография (HPLC) и ултравиолетово (UV) откриване; Второ, целта на това проучване беше да се определи съдържанието на меламин в адаптираното мляко на прах и млякото на прах, продавани на иранския пазар.
Инструментите, използвани за анализ на меламин, варират в зависимост от мястото на производство на храни. За измерване на остатъци от меламин в млякото и адаптираното мляко за кърмачета е използван чувствителен и надежден метод за HPLC-UV анализ. Млечните продукти съдържат различни протеини и мазнини, които могат да повлияят на измерването на меламин. Следователно, както отбелязва Sun et al.22, е необходима подходяща и ефективна стратегия за почистване преди инструменталния анализ. В това проучване използвахме филтри за спринцовки за еднократна употреба. В това проучване използвахме колона C18 за разделяне на меламина в адаптираното мляко за кърмачета и млякото на прах. Фигура 1 показва хроматограмата за откриване на меламин. Освен това, възстановяването на пробите, съдържащи 0,1–1,2 mg/kg меламин, варира от 95% до 109%, уравнението на регресия е y = 1,2487x − 0,005 (r = 0,9925), а стойностите на относителното стандартно отклонение (RSD) варират от 0,8 до 2%. Наличните данни показват, че методът е надежден в изследвания концентрационен диапазон (Таблица 1). Инструменталната граница на откриване (LOD) и границата на количествено определяне (LOQ) на меламина бяха съответно 1 μg mL−1 и 3 μg mL−1. Освен това, UV спектърът на меламина показа абсорбционна лента при 242 nm. Методът за откриване е чувствителен, надежден и точен. Този метод може да се използва за рутинно определяне на нивото на меламин.
Подобни резултати са публикувани от няколко автори. Разработен е метод за високоефективна течна хроматография-фотодиоден масив (HPLC) за анализ на меламин в млечни продукти. Долните граници на количествено определяне са 340 μg kg−1 за мляко на прах и 280 μg kg−1 за адаптирано мляко за кърмачета при 240 nm. Filazzi et al. (2012) съобщават, че меламин не е открит в адаптираното мляко за кърмачета чрез HPLC. Въпреки това, 8% от пробите от мляко на прах съдържат меламин на ниво от 0,505–0,86 mg/kg. Tittlemiet et al.23 провеждат подобно проучване и определят съдържанието на меламин в адаптираното мляко за кърмачета (номер на проба: 72) чрез високоефективна течна хроматография-масспектрометрия/MS (HPLC-MS/MS) на приблизително 0,0431–0,346 mg kg−1. В проучване, проведено от Venkatasamy et al. (2010) за оценка на меламина в адаптираното мляко и млякото са използвани подход на зелена химия (без ацетонитрил) и високоефективна течна хроматография с обратна фаза (RP-HPLC). Диапазонът на концентрациите на пробата е от 1,0 до 80 g/mL, а отговорът е линеен (r > 0,999). Методът показва възстановяване от 97,2–101,2 в диапазона на концентрациите от 5–40 g/mL, а възпроизводимостта е по-малка от 1,0% относително стандартно отклонение. Освен това, наблюдаваните LOD и LOQ са съответно 0,1 g mL−1 и 0,2 g mL−124. Lutter et al. (2011) определят замърсяването с меламин в краве мляко и адаптирано мляко на млечна основа, използвайки HPLC-UV. Концентрациите на меламин варират от < 0,2 до 2,52 mg kg−1. Линейният динамичен диапазон на HPLC-UV метода беше от 0,05 до 2,5 mg kg−1 за краве мляко, от 0,13 до 6,25 mg kg−1 за адаптирано мляко за кърмачета с масова фракция на протеина <15% и от 0,25 до 12,5 mg kg−1 за адаптирано мляко за кърмачета с масова фракция на протеина 15%. Резултатите за LOD (и LOQ) бяха 0,03 mg kg−1 (0,09 mg kg−1) за краве мляко, 0,06 mg kg−1 (0,18 mg kg−1) за адаптирано мляко за кърмачета <15% протеин и 0,12 mg kg−1 (0,36 mg kg−1) за адаптирано мляко за кърмачета 15% протеин, със съотношение сигнал/шум съответно 3 и 1025 за LOD и LOQ. Diebes et al. (2012) изследваха нивата на меламин в проби от адаптирано мляко за кърмачета и мляко на прах, използвайки HPLC/DMD. В адаптираното мляко за кърмачета най-ниските и най-високите нива са съответно 9,49 mg kg−1 и 258 mg kg−1. Границата на откриване (LOD) е 0,05 mg kg−1.
Javaid et al. съобщават, че остатъците от меламин в адаптираното мляко за кърмачета са в диапазона от 0,002–2 mg kg−1 чрез инфрачервена спектроскопия с Фурие трансформация (FT-MIR) (LOD = 1 mg kg−1; LOQ = 3,5 mg kg−1). Rezai et al.27 предлагат HPLC-DDA (λ = 220 nm) метод за оценка на меламина и постигат LOQ от 0,08 μg mL−1 за мляко на прах, което е по-ниско от нивото, получено в това проучване. Sun et al. разработват RP-HPLC-DAD за откриване на меламин в течно мляко чрез твърдофазна екстракция (SPE). Те получават LOD и LOQ съответно от 18 и 60 μg kg−128, което е по-чувствително от настоящото проучване. Montesano et al. потвърдиха ефективността на метода HPLC-DMD за оценка на съдържанието на меламин в протеинови добавки с граница на количествено определяне от 0,05–3 mg/kg, който беше по-малко чувствителен от метода, използван в това проучване29.
Несъмнено аналитичните лаборатории играят важна роля в опазването на околната среда чрез мониторинг на замърсителите в различни проби. Използването на голям брой реактиви и разтворители по време на анализа обаче може да доведе до образуването на опасни остатъци. Поради това през 2000 г. е разработена зелена аналитична химия (GAC), за да се намалят или елиминират неблагоприятните ефекти на аналитичните процедури върху операторите и околната среда26. Традиционни методи за откриване на меламин, включително хроматография, електрофореза, капилярна електрофореза и ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA), са използвани за идентифициране на меламин. Сред многобройните методи за откриване обаче, електрохимичните сензори са привлекли голямо внимание поради отличната си чувствителност, селективност, бързото време за анализ и удобните за потребителя характеристики30,31. Зелената нанотехнология използва биологични пътища за синтезиране на наноматериали, което може да намали генерирането на опасни отпадъци и потреблението на енергия, като по този начин насърчава прилагането на устойчиви практики. Нанокомпозити, например, изработени от екологично чисти материали, могат да се използват в биосензори за откриване на вещества като меламин32,33,34.
Проучването показва, че твърдофазната микроекстракция (SPME) се използва ефективно поради по-високата си енергийна ефективност и устойчивост в сравнение с традиционните методи за екстракция. Екологичността и енергийната ефективност на SPME я правят отлична алтернатива на традиционните методи за екстракция в аналитичната химия и осигуряват по-устойчив и ефикасен метод за подготовка на проби35.
През 2013 г. Ву и др. разработиха високочувствителен и селективен биосензор с повърхностен плазмонен резонанс (мини-SPR), който използва свързването между меламин и анти-меламинови антитела за бързо откриване на меламин в адаптираното мляко с помощта на имуноанализ. SPR биосензорът, комбиниран с имуноанализ (използващ меламин-конюгиран говежди серумен албумин), е лесна за използване и нискобюджетна технология с граница на откриване от само 0,02 μg mL-136.
Насири и Абасиан използваха преносим сензор с висок потенциал в комбинация с композити от графенов оксид-хитозан (GOCS) за откриване на меламин в търговски проби37. Този метод показа ултрависока селективност, точност и реакция. GOCS сензорът демонстрира забележителна чувствителност (239,1 μM−1), линеен диапазон от 0,01 до 200 μM, афинитетна константа от 1,73 × 104 и LOD до 10 nM. Освен това, проучване, проведено от Chandrasekhar et al. през 2024 г., възприе екологичен и рентабилен подход. Те използваха екстракт от кора на папая като редуциращ агент за синтезиране на наночастици от цинков оксид (ZnO-NPs) по екологичен метод. Впоследствие беше разработена уникална техника за микро-Раманова спектроскопия за определяне на меламин в адаптираното мляко за кърмачета. ZnO-NPs, получени от селскостопански отпадъци, демонстрираха потенциал като ценен диагностичен инструмент и надеждна, нискобюджетна технология за наблюдение и откриване на меламин38.
Alizadeh et al. (2024) използваха високочувствителна флуоресцентна платформа с металоорганична рамка (MOF) за определяне на меламин в мляко на прах. Линейният диапазон и долната граница на откриване на сензора, определени с помощта на 3σ/S, бяха съответно от 40 до 396,45 nM (еквивалентно на 25 μg kg−1 до 0,25 mg kg−1) и 40 nM (еквивалентно на 25 μg kg−1). Този диапазон е доста под максимално допустимите нива на остатъци (MRL), определени за идентифициране на меламин в адаптирано мляко за кърмачета (1 mg kg−1) и други проби от храни/фуражи (2,5 mg kg−1). Флуоресцентният сензор (тербиев (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) демонстрира по-висока точност и по-прецизна измервателна способност от HPLC39 при откриване на меламин в мляко на прах. Биосензорите и нанокомпозитите в зелената химия не само подобряват възможностите за откриване, но и минимизират опасностите за околната среда в съответствие с принципите на устойчивото развитие.
Принципите на зелената химия са приложени към различни методи за определяне на меламин. Един подход е разработването на метод за зелена дисперсионна твърдофазна микроекстракция, използващ естествения полярен полимер β-циклодекстрин, омрежен с лимонена киселина, за ефикасна екстракция на меламин 40 от проби като адаптирано мляко за кърмачета и гореща вода. Друг метод използва реакцията на Маних за определяне на меламин в млечни проби. Този метод е евтин, екологичен и с висока точност, с линеен диапазон от 0,1–2,5 ppm и ниска граница на откриване 41. Освен това е разработен рентабилен и екологичен метод за количествено определяне на меламин в течно мляко и адаптирано мляко, използващ инфрачервена трансмисионна спектроскопия с Фурие трансформация, с висока точност и граници на откриване съответно от 1 ppm и 3,5 ppm 42. Тези методи демонстрират приложението на принципите на зелената химия за разработване на ефикасни и устойчиви методи за определяне на меламин.
Няколко проучвания предлагат иновативни методи за откриване на меламин, като например използването на твърдофазна екстракция и високоефективна течна хроматография (HPLC)43, както и бърза високоефективна течна хроматография (HPLC), която не изисква сложна предварителна обработка или йонно-двойни реагенти, като по този начин намалява количеството химически отпадъци44. Тези методи не само осигуряват точни резултати за определяне на меламин в млечни продукти, но и отговарят на принципите на зелената химия, като минимизират употребата на опасни химикали и намаляват цялостното въздействие върху околната среда от аналитичния процес.
Четиридесет проби от различни марки бяха тествани в три екземпляра, а резултатите са представени в Таблица 2. Нивата на меламин в пробите от адаптирано мляко и мляко на прах варираха съответно от 0,001 до 0,004 mg/kg и от 0,001 до 0,095 mg/kg. Не са наблюдавани значителни промени между трите възрастови групи адаптирано мляко. Освен това, меламин е открит в 80% от млякото на прах, но 65% от адаптираните млека са замърсени с меламин.
Съдържанието на меламин в индустриалното мляко на прах е по-високо, отколкото в адаптираното мляко за кърмачета, като разликата е значителна (p<0,05) (Фигура 2).
Получените резултати бяха под границите, определени от FDA (под 1 и 2,5 mg/kg). Освен това, резултатите са в съответствие с границите, определени от CAC (2010) и EU45,46, т.е. максимално допустимата граница е 1 mg kg-1 за адаптирано мляко и 2,5 mg kg-1 за млечни продукти.
Според проучване от 2023 г. на Ghanati et al.47, съдържанието на меламин в различни видове пакетирано мляко в Иран варира от 50,7 до 790 μg kg−1. Техните резултати са под допустимата граница на FDA. Нашите резултати са по-ниски от тези на Shoder et al.48 и Rima et al.49. Shoder et al. (2010) установяват, че нивата на меламин в мляко на прах (n=49), определени чрез ELISA, варират от 0,5 до 5,5 mg/kg. Rima et al. анализират остатъци от меламин в мляко на прах чрез флуоресцентна спектрофотометрия и установяват, че съдържанието на меламин в млякото на прах е 0,72–5,76 mg/kg. През 2011 г. в Канада е проведено проучване за наблюдение на нивата на меламин в адаптираното мляко за кърмачета (n=94) с помощта на течна хроматография (LC/MS). Установено е, че концентрациите на меламин са под допустимата граница (предварителен стандарт: 0,5 mg kg−1). Малко вероятно е откритите измамни нива на меламин да са били тактика, използвана за увеличаване на съдържанието на протеини. Това обаче не може да се обясни с използването на торове, преместване на съдържанието на контейнери или подобни фактори. Освен това, източникът на меламин в млякото на прах, внесено в Канада, не е разкрит50.
Хасани и др. са измерили съдържанието на меламин в мляко на прах и течно мляко на иранския пазар през 2013 г. и са открили подобни резултати. Резултатите показват, че с изключение на една марка мляко на прах и течно мляко, всички останали проби са били замърсени с меламин, с нива, вариращи от 1,50 до 30,32 μg g−1 в мляко на прах и от 0,11 до 1,48 μg ml−1 в мляко. Забележително е, че цианурова киселина не е открита в нито една от пробите, което намалява възможността от отравяне с меламин за потребителите.51 Предишни проучвания са оценили концентрацията на меламин в шоколадови продукти, съдържащи мляко на прах. Около 94% от внесените проби и 77% от иранските проби са съдържали меламин. Нивата на меламин във внесените проби са варирали от 0,032 до 2,692 mg/kg, докато тези в иранските проби са варирали от 0,013 до 2,600 mg/kg. Като цяло, меламин е открит в 85% от пробите, но само една конкретна марка е имала нива над допустимата граница.44 Tittlemier et al. съобщават за нива на меламин в мляко на прах, вариращи от 0,00528 до 0,0122 mg/kg.
Таблица 3 обобщава резултатите от оценката на риска за трите възрастови групи. Рискът е по-малък от 1 във всички възрастови групи. Следователно, няма неканцерогенен риск за здравето от меламин в адаптираното мляко.
По-ниските нива на замърсяване в млечните продукти може да се дължат на неволно замърсяване по време на приготвянето, докато по-високите нива може да се дължат на умишлени добавки. Освен това, общият риск за човешкото здраве от консумацията на млечни продукти с ниски нива на меламин се счита за нисък. Може да се заключи, че консумацията на продукти, съдържащи толкова ниски нива на меламин, не представлява никакъв риск за здравето на потребителите52.
Като се има предвид значението на управлението на безопасността на храните в млечната промишленост, особено по отношение на защитата на общественото здраве, е от изключителна важност да се разработи и валидира метод за оценка и сравняване на нивата и остатъците от меламин в мляко на прах и адаптирано мляко за кърмачета. Разработен е прост и точен HPLC-UV спектрофотометричен метод за определяне на меламин в адаптирано мляко за кърмачета и мляко на прах. Методът е валидиран, за да се гарантира неговата надеждност и точност. Границите на откриване и количествено определяне на метода се оказаха достатъчно чувствителни, за да измерят нивата на меламин в адаптирано мляко за кърмачета и мляко на прах. Според нашите данни меламин е открит в повечето ирански проби. Всички открити нива на меламин са под максимално допустимите граници, определени от CAC, което показва, че консумацията на тези видове млечни продукти не представлява риск за човешкото здраве.
Всички използвани химични реактиви бяха с аналитична чистота: меламин (2,4,6-триамино-1,3,5-триазин) с чистота 99% (Sigma-Aldrich, Сейнт Луис, Мисури); ацетонитрил с HPLC чистота (Merck, Дармщат, Германия); ултрачиста вода (Millipore, Morfheim, Франция). Филтри за спринцовки за еднократна употреба (Chromafil Xtra PVDF-45/25, размер на порите 0,45 μm, диаметър на мембраната 25 mm) (Macherey-Nagel, Дюрен, Германия).
За приготвяне на пробите са използвани ултразвукова вана (Elma, Германия), центрофуга (Beckman Coulter, Крефелд, Германия) и HPLC (KNAUER, Германия).
Използван е високоефективен течен хроматограф (KNAUER, Германия), оборудван с UV детектор. Условията за HPLC анализ са следните: използвана е UHPLC Ultimate система, оборудвана с аналитична колона ODS-3 C18 (4.6 mm × 250 mm, размер на частиците 5 μm) (MZ, Германия). HPLC елуентът (мобилна фаза) е смес от TFA/метанол (450:50 mL) със скорост на потока 1 mL min-1. Дължината на вълната на детекция е 242 nm. Инжектираният обем е 100 μL, температурата на колоната е 20 °C. Тъй като времето на задържане на лекарството е дълго (15 минути), следващото инжектиране трябва да се направи след 25 минути. Меламинът е идентифициран чрез сравняване на времето на задържане и пика в UV спектъра на меламинови стандарти.
Стандартен разтвор на меламин (10 μg/mL) беше приготвен с вода и съхраняван в хладилник (4 °C), далеч от светлина. Разредете основния разтвор с мобилната фаза и пригответе работни стандартни разтвори. Всеки стандартен разтвор беше инжектиран в HPLC 7 пъти. Калибрационното уравнение 10 беше изчислено чрез регресионен анализ на определената площ на пика и определената концентрация.
Търговски достъпно краве мляко на прах (20 проби) и проби от различни марки адаптирано мляко на базата на краве мляко (20 проби) бяха закупени от местни супермаркети и аптеки в Иран за хранене на кърмачета от различни възрастови групи (0–6 месеца, 6–12 месеца и >12 месеца) и съхранявани при температура в хладилник (4 °C) до анализа. След това 1 ± 0,01 g хомогенизирано мляко на прах беше претеглено и смесено с ацетонитрил:вода (50:50, v/v; 5 mL). Сместа беше разбъркана в продължение на 1 минута, след това обработена с ултразвук в ултразвукова вана в продължение на 30 минути и накрая разклатена в продължение на 1 минута. След това сместа беше центрофугирана при 9000 × g за 10 минути при стайна температура и супернатантата беше филтрирана в 2 ml флакон за автосамплер, използвайки 0,45 μm филтър за спринцовка. Филтратът (250 μl) след това беше смесен с вода (750 μl) и инжектиран в HPLC системата10,42.
За да валидираме метода, определихме възстановяването, точността, границата на откриване (LOD), границата на количествено определяне (LOQ) и прецизността при оптимални условия. LOD беше дефиниран като съдържанието на пробата с височина на пика три пъти по-голяма от базовото ниво на шум. От друга страна, съдържанието на пробата с височина на пика 10 пъти по-голяма от съотношението сигнал/шум беше дефинирано като LOQ.
Отговорът на устройството беше определен с помощта на калибрационна крива, състояща се от седем точки от данни. Използвани са различни съдържания на меламин (0, 0.2, 0.3, 0.5, 0.8, 1 и 1.2). Определена е линейността на процедурата за изчисляване на меламин. Освен това към празните проби бяха добавени няколко различни нива на меламин. Калибрационната крива беше построена чрез непрекъснато инжектиране на 0.1–1.2 μg mL−1 от стандартен разтвор на меламин в проби от адаптирано мляко за кърмачета и мляко на прах, като R2 = 0.9925. Точността беше оценена чрез повторяемост и възпроизводимост на процедурата и беше постигната чрез инжектиране на проби през първия и трите следващи дни (в три екземпляра). Повторяемостта на метода беше оценена чрез изчисляване на RSD % за три различни концентрации на добавен меламин. Проведени са изследвания за възстановяване, за да се определи прецизността. Степента на възстановяване чрез метода на екстракция е изчислена при три нива на концентрация на меламин (0,1, 1,2, 2) в проби от адаптирано мляко за кърмачета и сухо мляко9,11,15.
Очакваният дневен прием (EDI) беше определен по следната формула: EDI = Ci × Cc/BW.
Където Ci е средното съдържание на меламин, Cc е консумацията на мляко, а BW е средното тегло на децата.
Анализът на данните е извършен с помощта на SPSS 24. Нормалността е тествана с помощта на теста на Колмогоров-Смирнов; всички данни са непараметрични тестове (p = 0). Поради това, за определяне на значимите разлики между групите са използвани тестът на Крускал-Уолис и тестът на Ман-Уитни.
Ингелфингер, младши. Меламин и неговото въздействие върху глобалното замърсяване на храните. New England Journal of Medicine 359(26), 2745–2748 (2008).
Lynch, RA, et al. Влияние на pH върху миграцията на меламин в детските купички. Международно списание за замърсяване на храните, 2, 1–8 (2015).
Barrett, MP и Gilbert, IH. Насочване на токсични съединения към вътрешността на трипанозомите. Progress in Parasitology 63, 125–183 (2006).
Nirman, MF и др. In vitro и in vivo оценка на меламинови дендримери като носители за доставяне на лекарства. International Journal of Pharmacy, 281(1–2), 129–132(2004).
Световна здравна организация. Експертни срещи 1–4 за преглед на токсикологичните аспекти на меламина и циануровата киселина (2008 г.).
Howe, AK-C., Kwan, TH и Lee, PK-T. Токсичност на меламина и бъбреците. Journal of the American Society of Nephrology 20(2), 245–250 (2009).
Ozturk, S. и Demir, N. Разработване на нов IMAC адсорбент за идентифициране на меламин в млечни продукти чрез високоефективна течна хроматография (HPLC). Journal of Food Synthesis and Analysis 100, 103931 (2021).
Chansuvarn, V., Panic, S. и Imim, A. Просто спектрофотометрично определяне на меламин в течно мляко, базирано на реакцията на Маних Грийн. Spectrochem. Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. 113, 154–158 (2013).
Deabes, M. и El-Habib, R. Определяне на меламин в проби от адаптирано мляко за кърмачета, мляко на прах и пангасиус чрез HPLC/диодна матрична хроматография. Journal of Environmental Analytical Toxicology, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012).
Скинър, К. Г., Томас, Дж. Д. и Остерлох, Дж. Д. Токсичност на меламина. Journal of Medical Toxicology, 6, 50–55 (2010).
Световна здравна организация (СЗО), Токсикология и здравни аспекти на меламина и циануровата киселина: Доклад от съвместна експертна среща на СЗО/ФАО, подкрепена от Health Canada, Отава, Канада, 1-4 декември 2008 г. (2009 г.).
Korma, SA и др. Сравнително изследване на липидния състав и качеството на прах за бебешка формула, съдържащ нови функционални структурни липиди, и търговска бебешка формула. European Food Research and Technology 246, 2569–2586 (2020).
Ел-Уасиф, М. и Хашем, Х. Повишаване на хранителната стойност, качествените характеристики и срока на годност на адаптираното мляко за кърмачета с помощта на палмово масло. Middle East Journal of Agricultural Research 6, 274–281 (2017).
Yin, W. и др. Производство на моноклонални антитела срещу меламин и разработване на индиректен конкурентен ELISA метод за откриване на меламин в сурово мляко, сухо мляко и храна за животни. Journal of Agricultural and Food Chemistry 58(14), 8152–8157 (2010).